伏安酶联免疫分析法在其他方面的应用
乙型肝炎病毒抗原抗体的测定,病毒性肝炎主要包括甲型(HAV)乙性(HBV)和非甲非乙型三种,其中以乙型肝炎的危害性zui大。这是因为机体在感染了乙型肝炎病毒后,除急性表现外,尚有相当一部分转化为慢性肝炎、无症状带病毒者,其中一部分会将发展为肝硬化,甚至肝癌,导致死亡。因此对乙型肝炎的防治和寻找早期灵敏的诊断方法将很受关注。目前常用的分析方法有放射免疫分析法和ELISA法等。两个伏安酶联免疫分析体系应用于人血清中乙型肝炎病毒多种抗原抗体的电化学测定,取得了令人满意的结果。
(1) ODA-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析体系,采用双抗体夹心法测定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测得线性范围为1:1~1:384,检测限为1:384,灵敏度是ELISA分光光度法的16倍。
采用双抗原夹心法测定乙型肝炎表面抗体(HBsAb),测得线性范围为1:1~1:256,检测限为1:256,灵敏度是ELISA分光光度法的2倍。
乙型肝炎核心抗体(HBcAb)测定是采用异相竞争法进行的,测定得到的线性范围是1:1~1:512,检测限为1:512,灵敏度是ELISA分光光度法的2倍。
乙型肝炎E抗原(HBeAg)的测定方法同HBsAb。测定得到的线性范围是1:1~1:1024,检测限为1:1024,灵敏度可达ELISA分光光度法的16倍。
乙型肝炎E抗体(HBeAb)的测定是乙型肝炎诊断的一项重要指标,采用竞争性抑制免疫反应对其进行测定。实验结果,测得线性范围为1:1~1:384,检测限为1:384,灵敏度是ELISA分光光度法的,4倍。
同时,以ODA-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析体系对10份人血清样品进行了测定,测定结果与ELISA分光光度法进行对照,结果*一致,两者具有很好的相关性。
(2) OT-H2 O2-HRP伏安酶联免疫分析体系,乙型肝炎病毒5种抗原抗体的测定方法同ODA-H2O2-HRP体系,按照实验方法对HBsAg、HBsAb 、HBcAb、HBeAg和 HBeAb进行测定,所得的线性范围分别为 1:1~1:512、1:1:~1:1024、1:1~1:1024、1:1~1:1024和1:1~1:1536,对应的检测限分别为1:512、1:1024、1:1024、1:1024和1:1536,灵敏度分别是ELISA分光光度法的16倍、8倍、2倍、16倍和16倍。对人血清样品分析的结果也与ODA-H2O2-HRP体系所测得结果*一致。
人血清铁蛋白的测定
人血清铁蛋白的测定(Ferritin)为一储存及利用铁的蛋白质,主要储存于网状肉皮系统及骨髓中。人铁蛋白微量存在于血清中,但血清铁蛋白浓度的水平及其变化可以反映体内的铁储备,铁蛋白的测定是缺铁性贫血及肝癌的一项重要指标。因而较广泛地用于临床某些血液疾病的诊断及鉴别诊断。目前临床检测中测定铁蛋白的常用方法有间接血凝试验、双扩散及ELISA等方法。OAP-H2O2-HRP、MAP-H2O2-HRP、PAP-H2O2-HRP等伏安酶联免疫分析测定人血清中铁蛋白的新方法。该方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化电化学底物的产物,采用双抗体夹心免疫分析法对铁蛋白进行测定,灵敏度高于经典的ELISA分光光度法。三个体系对铁蛋白测定的线性范围分别为0.2~320ng/ML、0.25~320 ng/ML、和0.2~320 ng/ML。用所建立的方法对人血清样品进行测定,并与现行的ELISA分光光度法进行对照,二者相关性好。