口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法) |
||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||
| 文件下载 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 详细介绍 | ||||||||||||||||||||||||||||
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法) 【产品名称】 商品名称：口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法) 【包装规格】 50T/盒 【货 号】 XC-2010 【预期用途】 本试剂盒适用于检测的扁桃体、淋巴结等组织病变部与健康部交界处组织、全血等标本中口蹄疫病毒 RNA， 适用于口蹄疫病毒感染 的辅助诊断。 【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 RT-PCR 技术，通过设计 1 对口蹄疫病毒特异性引物，结合 1 条特异性探针，用荧光 RT-PCR 技术对口蹄疫病毒核酸进行体外扩增检测， 用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。 【试剂组成】 名 称 规 格 酶液 50μL×1 管 FMDV-U 反应液 950uL×1 管 FMDV-U 阳性质控品 50μL ×1 管 阴性质控品 50μL ×1 管 备注：不同批号的试剂盒组分不宜交叉使用。 【储存条件及有效期】 -20℃±5℃， 避光保存、运输、反复冻融≤5 次， 有效期 12 个月。 【适用仪器】 ABI 系列 、安捷伦 MX3000P/3005P、Bio-Rad 等系列荧光定量 PCR 检测仪。 【标本采集】 病死或扑杀猪，取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等 【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃， 长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月， 标本运送应采用2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。 【使用方法】 1. 样品处理(样本处理区) 1.1 样本前处理 组织样品： 每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g， 手术剪剪碎混匀后取 0.5g于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理盐水后继续 研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min， 取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中； 全血样本：待血凝固后， 取血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。 1.2 RNA 提取 推荐采用深圳市迅测生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒(离心柱提取法/磁珠法)，请按照试剂盒说明书进行操作。 2. 试剂配制(试剂准备区) 根据待检测样本总数， 设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照，每个测试反应体系配制如下表： 试剂 FMDV-U 反应液 酶液 用量(样本数为 N) 19μL 1μL 3. 加样(样本处理区) 将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL， 分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 4. PCR 扩增(核酸扩增区) 4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL； 荧光通道选择： 检测通道选择 CY5 检测， 淬灭通道选择 NONE， 参比荧光选 NONE。 4.3推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 50℃ 15min 否 2 1 cycle 95℃ 3min 否 3 45cycles 95℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold： 一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)， 重新分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤38.0， 且曲线有明显的指数增长曲线。 可疑：检测通道 Ct 值>38.0， 且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤38.0 和典型扩增曲线者为阳性， 否则为阴性。 阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。 6. 质控标准 阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期， 且 Ct 值≤30； 以上条件应同时满足， 否则实验视为无效。 7. 检测方法的局限性 ➢ 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； ➢ 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； ➢ 阳性对照、扩增产物泄漏， 会导致假阳性结果； ➢ 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； ➢ 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； ➢ 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； ➢ 本检测结果仅供参考， 如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。 【注意事项】 ➢ 所有操作严格按照说明书进行； ➢ 试剂盒内各种组分使用前应自然融化， 完全混匀并短暂离心； ➢ 反应液应避光保存； ➢ 反应中管盖需盖紧； ➢ 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服； ➢ 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染； ➢ 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器； ➢ 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。 从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验技术及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十多年，是您值得信赖的科研合作伙伴! 如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验技术服务：
|
||||||||||||||||||||||||||||
