土壤酸性转化酶 (S-AI) 活性检测试剂盒

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：50T/24S

产品内容：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1 支，4℃保存，10mg 无水葡萄糖。临用前加入 1mL 试剂一溶解,制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。

产品说明：

S-AI 在 pH 为 4.5~5.0  (酸性) 条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代谢关键酶之一。

S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 AI 活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、甲苯。

操作步骤：

一、样品处理：

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50  目筛。

二、测定步骤及加样表：

1 、分光光度计/酶标仪预热 30min ，波长调至 540nm ，蒸馏水调零。

2 、标准液的稀释：将 10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖标准溶液备用。

3 、加样表：

混匀，煮沸 10min 左右 (盖紧，以防止水分流失) ，流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调

零，记录各管吸光值A ，记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照 管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、S-AI 活性计算：

1 、  标准曲线的绘制：

以葡萄糖浓度为 x 轴，相应的ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b；将ΔA 带 入公式得到 x  ( mg/mL)

2 、  S-AI 活性计算

单位定义：37℃每 g 土壤每天产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI  (U/g) =x×V 酶促÷W÷T

V 酶促：酶促反应总体积，0.820mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：1/24d；

注意事项：

1 、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀 (10000rpm ，2min ) ，取上 清测定吸光度；

2 、如果吸光值大于 1 ，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种 操作均要注意改变公式中的稀释倍数。

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