Bacterial Protein Extraction Kit
细菌蛋白抽提试剂盒
保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温
产品内容
Component | K0888S | K0888M |
25 preps | 100 preps | |
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Bacterial Protein Extraction Reagent | 25 ml | 100 ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 250 μl | 1 ml |
Lysozyme （50 mg/ml） | 50 μl | 200 μl |
DNaseⅠ（1,000 U/ml） | 25 μl | 100 μl |
产品简介
细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌及昆虫细胞表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP、Western blot、蛋白纯化等下游操作。
注意事项
1．本产品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
2．本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
3．使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
4．对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
5．根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。
操作步骤
● 昆虫细胞蛋白提取
1．低速离心收集细胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
2．称量细胞湿重，按10 ml/g的量加入1×工作液。
3．重悬后，冰上孵育20分钟（冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
4．15,000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。
● 细菌可溶性蛋白提取
1．5,000×g离心10分钟，收集菌体。
2．可选步骤：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
3．按照每克菌体沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉
淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体*重悬。
4．重悬后，室温孵育10-15分钟（放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
5．15,000×g离心5分钟。
6．转移上清至新的离心管中（上清中即为可溶性蛋白），进行蛋白定量及下游实验。
注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液（K0007）进行溶解或优化表达
条件增加可溶性蛋白的表达。
常见问题
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
目的蛋白不溶 | 目的蛋白表达为包涵体 | 优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液 |
在蛋白抽提试剂中加入 Lysozyme 和 DNase I | ||
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加入Lysozyme 后目的蛋白 | 温度过低 | 将使用试剂恢复至室温 |
仍没有提取出来 | Lysozyme 活性降低或失活 | 加入更多的 Lysozyme 或更换新的酶 |
提取物粘度高 | DNase I 活性降低或失活 | 加入更多的 DNase I 或更换新的 DNase I |
将镁离子的终浓度增加至 2 mM | ||
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蛋白抽提后仍有大部分蛋 | 蛋白量过大 | 加入 Lysozyme 及 DNase I |
白存在于沉淀中 | ||
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蛋白抽提试剂有沉底析出 | 温度过低 | 将蛋白抽提试剂恢复至室温 |
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
实验代做服务：
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