Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒说明书

Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

目录号：K2384

组分说明及保存条件

           Cat. No.          K2384

                                            保存条件

           Size             约 50块胶

         49.5%T 3%C         30 ml               2-8ºC

         49.5%T 6%C         100 ml               2-8ºC

         凝胶缓冲液           140 ml               2-8ºC

         甘油                30 ml               室温

         APS                0.5 g                室温

         TEMED               750 ul           室温，避光

本产品所提供的 APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS溶液（0.5 g  APS加5 ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其

是10 kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD

的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS-

PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方

便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

注意事项

1.  10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每

次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用

-20度保存的10%APS。

2.在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

3.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

4.丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

5.本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

 I 配制分离胶

1．将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。

2．加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约4 ml），

   然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3  cm的水层，使凝胶表面保持平整。

4．静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

 II 配制夹层胶

  去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

1．将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于1 mm的mini-gel，夹层胶溶液加

   约1 ml ），然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。

4．静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

III 配制浓缩胶

去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

    1．将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

    2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

    3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

    4．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

    5．进行电泳操作。

IV 电泳

将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液（K2388），内槽加入阴极缓冲液（K2387），30V预电泳10 min，将样品（已经过Tricine上样缓冲液YJ2385处理）加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

实验代做服务：