炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

【产品名称】

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反

应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

通用名称：炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

Name

：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

4  扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量  PCR  仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择：  检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None  即可。

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一种人兽共患病。BA

在环境中形成芽孢，可长期、稳定地存在于自然界中。由于 BA  的稳定性及其致

病性，易引发突发公共卫生事件。目前的 BA  检测方法主要基于病原体的培养、染色

镜检、血清学检测等，但这些方法均不适合早期的快速侦检。基于核酸检测的荧光-PCR

技术，因其灵敏度高、操作简单、特异性好，可快速检测炭疽病原，及时控制炭疽疫

4.3  推荐循环参数设置：

步骤

循环数

温度

95℃

94℃

55℃

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

10min

15sec

30sec

否

否

是

情

[1]

。

2

40 cycles

本试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌，用于

炭疽杆菌感染的辅助诊断。

5  结果分析判定

6.1结果分析条件设定

【检验原理】

[2-3]

，用荧光 PCR  技术对炭疽

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现

整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15  范围内调

节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动

阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

本试剂对炭疽杆菌特异性基因设计引物和荧光探针

杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名

称

格

7结果判断

核酸提取液

酶液

1.5mL×2  管

50μL×1 管

1.0mL×1 管

50μL×1 管

250μL×1 管

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，丏曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，丏出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试

验结果出现 Ct 值≤35.0  和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct  值丏无明显的扩增曲线。

BA  反应液

BA  阳性质控品

阴性质控品

8 检测方法的局限性

注：

1）不同批号试剂不能混用。

Ø  样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

Ø  样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

Ø  阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

Ø  病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

Ø  不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

Ø  试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定

量检测不准确的结果；

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融数不超过 5 次，有效期 12  个月。

【适用仪器】

ABI  、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf  等系列

荧光定量 PCR  检测仪。

Ø  本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

9.  质控标准

【标本采集】

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct  值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，丏 Ct  值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

皮肤炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子标本，放入标本采集管中；肠炭

疽，取粪便  1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6  个月，标本

运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【注意事项】

Ø  所有操作严格按照说明书进行；

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心；

Ø  反应液应避光保存；

【使用方法】

1.  样品处理（样本处理区）

Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

Ø  使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

Ø  试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通

则》进行处理。

实验代做服务：